BD 556547 ANXN V FITC APOPTOSIS DTEC KIT I 细胞凋亡试剂盒

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒 100T 

产品简介

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒zui经典的一款

产品详细信息

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒说明书
一、概述
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡zui早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA的片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的组份：

Product code Description
556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的操作步骤 ：
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。

四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的保存：

4℃保存，两个月内可保持稳定；避免反复冻融。

五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒的注意事项 ：
（1）本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（4）整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作，以免影响细胞状态。
（5）在细胞洗涤的zui后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果。
（6）为防止荧光衰变，宜在1小时内进行流式检测。
（7）PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I产品介绍：
细胞凋亡是在胚胎发育或组织更新维护过程中的出现的一种正常生理过程。细胞凋亡程序有显著的形态学特征，包括质膜不对性和吸附性的丧失，细胞质和细胞核的皱缩，DNA核小体分裂。质膜溶解是zui早出现的特征。在凋亡细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）会从磷脂双层内部转移到外部，使PS暴露在细胞外环境中。 Annexin V是一个分子量为35-36 kDa的Ca2+依赖型磷脂结合蛋白质，其对PS有高亲和性，可以结合到暴露到质膜外层的PS。Annexin V可以结合荧光染料，包括FITC。这种结合既保留了对PS的高亲和性，同时可以作为灵敏探针，用流式细胞分析检测鉴定正在凋亡的细胞。由于PS变化出现在细胞凋亡早期，FITC Annexin V染色可以更早地鉴定出调亡细胞，比基于细胞核变化的检测，例如DNA断裂要早。

FITC标记的 Annexin V 染色先于细胞凋亡或细胞坏死过程中伴随产生的细胞膜完整性丧失的出现。因此，利用FITC标记的Annexin V染色时通常结合活体染料如碘化丙啶（PI）或7-Amino-Actinomycin（7-AAD），方便研究者鉴定出早期凋亡细胞（PI阴性，FITC Annexin V阳性）。具备完整细胞膜的活细胞可以阻止PI浸入，然而细胞膜坏死或破坏后就可以浸透PI。例如，活细胞检测结果应该是FITC Annexin V 阴性和 PI 阴性；早期凋亡细胞是FITC Annexin V 阳性 and PI 阴性；晚期凋亡细胞或已死亡细胞是FITC Annexin V 阳性和 PI阳性。此检测不能区分出经历过凋亡的死细胞和经历其它坏死途径的死细胞，因为二者都会同时被FITC Annexin V 和 PI染色。然而，持续观察细胞凋亡都会经历三个阶段：FITC Annexin V 和 PI 都是阴性（活细胞或没有明显细胞凋亡）；Annexin V阳性 和 PI 阴性（凋亡早期，具有完整细胞膜）；FITC Annexin V and PI 都是阳性（凋亡晚期或死亡）。经历这三个阶段的细胞表明是经历细胞凋亡过程。相反，单一观察显示细胞FITC Annexin V和 PI都是阳性不能反映出细胞是否经历凋亡过程。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I产品组份：
Part A: 51-66121E, 10X Annexin V Binding Buffer, 50 ml
Part B: 51-65874X, FITC Annexin V , 0.5 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl
Part C: 51-66211E, Propidium Iodide Staining Solution 2.0 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl