产品概述:
Thermo Scientific EZ-Link Phosphine-PEG4-Desthiobiotin 是一种聚乙二醇化试剂,其生物素样基团可从链霉亲和素中洗脱,激活后可用于化学选择性连接和纯化代谢标记的叠氮化物靶标。
EZ-Link Phosphine-PEG4-Desthiobiotin 的特点:
• Desthiobiotin — 生物素的类似物可以轻松从链霉亲和素中洗脱,这是亲和纯化应用的理想特性
•化学选择性— 膦反应基团在生物样品中对叠氮化物标记分子具有特异性,确保特异性标记目标的捕获和纯化
•兼容—施陶丁格反应化学在简单的缓冲条件下有效进行;不需要辅助试剂,例如铜或还原剂
• PEG 间隔臂 - 聚乙二醇间隔臂有助于保持标记分子的溶解性并降低与亲和素、链霉亲和素或 NeutrAvidin 亲和结合的空间位阻
•可溶性- 易溶于水混溶性溶剂(例如,DMSO)用于随后在含有细胞裂解物和其他生物样品的水性反应混合物中稀释
当与叠氮化物标记策略结合使用时,膦-PEG4-脱硫生物素能够使用链霉亲和素树脂对蛋白质相互作用和翻译后修饰进行亲和纯化。膦部分通过Staudinger 反应机制对已用生物正交叠氮基团标记或代谢标记的分子。脱硫生物素标签以高特异性与链霉亲和素和其他生物素结合蛋白结合,但在温和条件下很容易洗脱(即,通过与常规、游离生物素的竞争性置换)。因此,对于需要标记蛋白质的非变性洗脱的亲和素-生物素技术,该试剂是膦-PEG3-生物素(部件号 88901)的有用替代品。无称量形式(5 x 1 mg 可重新密封的小瓶)消除了称量少量试剂相关的困难,并最大限度地保护未使用的试剂免于降解。
脱硫生物素与生物素
脱硫生物素是一种单环、无硫的生物素类似物,与链霉亲和素结合的特异性几乎相同,但亲和力低于生物素(1/Kd = 10 11vs. 10 15米,分别)。因此,脱硫生物素化的诱饵蛋白及其相互作用的伙伴可以使用基于与游离生物素的竞争性置换的温和条件从链霉亲和素亲和树脂中容易且特异性地洗脱。对于生物样品的下拉测定实验,脱硫生物素的这种软释放特性还有助于最大限度地减少内源性生物素化分子的共纯化,这些分子在目标蛋白复合物与游离生物素洗脱后仍与链霉亲和素结合。改良的亲和素-生物素亲和系统还消除了使用可能使复合物解离和/或损坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件的需要。
用磷化氢试剂标记叠氮化物基团可以通过 用天然存在的代谢构件的叠氮化物衍生物进行体内
标记而被引入蛋白质或其他细胞靶标 中。因为膦和叠氮化物是外来的并且对生物系统不可见(生物正交),它们包含用于标记和缀合的化学选择性(相互特异性)连接对。